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饲料添加剂 第5部分：微生物酿酒酵母总结

核心内容概述

本文件为《饲料添加剂》国家标准的第501部分，规范了饲料添加剂中酿酒酵母的技术要求、取样、试验方法、检验规则、标签、包装、运输和贮存等。该标准替代了GB/T22547—2008，适用于以酿酒酵母为菌种，经液态发酵、脱水干燥而制得的饲料添加剂产品。

主要观点

• 产品分类：酿酒酵母属于GB7300标准的第5大类“微生物”。
• 标准更新：相较于2008年版，本标准在外观与性状、酵母活细胞数、卫生指标等方面进行了修订，并新增了酵母活细胞数检测方法的平板法。
• 检测方法：本标准规定了多种检测方法，包括感官检验、菌种鉴别、理化指标检测、卫生指标检测等，其中平板法为仲裁法。

关键信息

1. 技术要求

1.1 外观与性状

• 酵母应为淡黄色至淡棕黄色颗粒，具有酵母特殊气味，无腐败、异臭味和异物。

1.2 菌种鉴别

• 酵母应符合酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）的形态、生理生化和分子生物学特性。

1.3 理化指标

• 酵母活细胞数应≥8×10⁹ CFU/g 或个/g（单位根据检测方法不同而定）。
• 水分含量应≤6.0%。

1.4 卫生指标

• 铅含量≤1.5 mg/kg；
• 总砷含量≤2.0 mg/kg；
• 汞含量≤0.1 mg/kg；
• 镉含量≤0.5 mg/kg；
• 沙门氏菌不得检出。

2. 取样

• 采样原则：样品应随机、代表性采集，采样过程应遵循无菌操作。
• 采样方法：
  • 同一批次产品中采样，每件样品不少于500 g；
  • 小于等于500 g的独立包装取完整包装；
  • 大于500 g的独立包装应从不同部位取样，合并为一件样品。
• 样品贮存与运输：
  • 应尽快送检，保持样品完整；
  • 贮存和运输应尽量接近原有温度，防止微生物数量变化。

3. 试验方法

• 感官检验：观察形态、色泽、杂质及气味。
• 菌种鉴别：采用附录A中的方法，以平板法为仲裁法。
• 酵母活细胞数测定：采用附录B中规定的两种方法（平板法和染色法）。
• 水分测定：采用GB/T6435标准。
• 重金属检测：
  • 总砷：GB/T13079；
  • 铅：GB/T13080；
  • 汞：GB/T13081；
  • 镉：GB/T13082。
• 沙门氏菌检测：采用GB/T13091标准。

4. 检验规则

• 组批：以相同材料、相同工艺、同一班次生产的产品为一批，每批不超过50 t。
• 出厂检验：包括外观、酵母活细胞数和水分。
• 型式检验：包括所有技术要求项目，每年至少进行一次；在以下情况下也应进行：
  • 产品定型投产时；
  • 工艺、配方或原料有重大变化时；
  • 停产3个月以上恢复生产时；
  • 出厂检验结果与上次型式检验结果差异较大时；
  • 饲料管理部门提出检验要求时。
• 判定规则：
  • 所有项目合格则判定为合格；
  • 任一指标不合格，可复检，但复检结果仍不合格则判定为不合格；
  • 沙门氏菌指标不得复检；
  • 极限数值判定采用GB/T8170的全数值比较法。

5. 标签、包装、运输和贮存

• 标签：应符合GB10648的规定。
• 包装：应清洁、防污染、防潮、防漏。
• 运输：应保持清洁，防止暴晒、雨淋，不应与有毒有害物品混装。
• 贮存：应存放在通风、干燥、防暴晒、防雨淋的仓库中，有防虫防鼠设施，不应与有毒有害物质混贮。

附录内容

附录A：菌种鉴别方法

• 形态鉴别：
  • 在麦芽汁液体培养基中，菌体紧密沉淀于底部，培养液清亮，无菌膜；
  • 在麦芽汁琼脂培养基上，菌落大而湿润，微隆起或平坦，乳白色，表面光滑，边缘整齐；
  • 在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，无假菌丝或假菌丝不典型；
  • 在产孢子培养基上，能产生子囊孢子，每囊1～4个圆形光面孢子。
• 生理生化特性：
  • 酒精发酵：葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、蔗糖、蜜二糖、松三糖可发酵；
  • 阴性反应：乳糖、纤维二糖、山梨糖、甘露醇、肌醇、熊果苷、乙醇、甘油、赤藓醇等。
• 分子生物学鉴定：
  • 采用核酸序列分析法，检测26S rDNA D1/D2区和ITS序列；
  • 与GenBank中Saccharomyces cerevisiae序列进行同源性比较，差异小于1%则为酿酒酵母。

附录B：酵母活细胞数测定方法

• 第一法：平板法（仲裁法）：
  • 按GB4789.15—2016第一法操作，稀释液温度为37℃～40℃。
• 第二法：染色法：
  • 原理：活酵母可还原次甲基蓝，死酵母则被染成蓝色。
  • 试剂：无菌生理盐水、次甲基蓝染色液。
  • 仪器：显微镜（放大倍数≥400）、血球计数板、盖玻片、分析天平、恒温水浴。
  • 试验步骤：
    • 称取0.1 g样品，加入37℃～40℃无菌生理盐水20 mL，振荡分散，32℃活化1 h；
    • 加入次甲基蓝染色液，静置染色10 min；
    • 使用血球计数板进行细胞计数，按“数上不数下，数左不数右”原则计数活细胞。
  • 结果计算：
    • 按式(B.1)计算每克样品中的活细胞数，单位为个/g。
  • 精密度：两次独立测试结果的绝对差值不大于算术平均值的10%。

总结

本标准详细规定了饲料添加剂中酿酒酵母的产品技术要求、检测方法及管理规范，确保产品质量与安全。其更新内容涵盖外观、活细胞数、卫生指标等，强化了检测方法的科学性与准确性。标准适用于饲料添加剂生产、检验和使用全过程，是保障饲料安全的重要依据。