2012-11-05-世界卫生组织-Neurovirulence_Test_of_Types_1,_2_or_3_Live_attenuated_Poliomyelitis_vaccines_Oral_in_Monkeys_18页_362kb

总结：世界卫生组织（WHO）关于口服脊髓灰质炎疫苗（OPV）神经毒性的检测标准操作程序（SOP）

核心内容

本文件是世界卫生组织（WHO）发布的关于检测口服脊髓灰质炎疫苗（OPV）神经毒性的标准操作程序（SOP），适用于类型1、2和3的减毒活疫苗。该SOP旨在确保疫苗的安全性，通过在猴子中进行实验来评估其神经毒性的风险。

主要观点

• 检测目的：评估疫苗是否具有神经毒性，确保其安全使用。
• 检测对象：使用Macaca或Cercopithecus猴子进行实验。
• 检测标准：疫苗和参考病毒应同时测试，确保病毒含量在5.5至6.5 log₁₀/0.1ml之间。
• 实验流程：包括疫苗接种、观察、解剖、组织切片、评分和统计分析。
• 评分标准：根据组织切片中病变的严重程度进行分级，分为4个等级。
• 结果评估：基于平均病变评分（LS）与参考疫苗的比较，结合统计常数C₁、C₂和C₃进行判断。
• 数据记录：要求使用标准表格记录每只猴子各组织切片的病变评分。

关键信息

1.1 猴子数量

• 类型1和2疫苗应至少有11只阳性猴子（即显示典型脊髓灰质炎神经病变）。
• 类型3疫苗应至少有18只阳性猴子。
• 实验通常使用12或20只猴子，以确保足够的阳性数量。
• 所有猴子应随机分配至疫苗或参考病毒组。
• 若无法使用同一隔离组的猴子，应使用两个隔离组的猴子进行测试。

1.2 疫苗与参考病毒的病毒含量

• 疫苗与参考病毒的病毒含量应尽可能相似。
• 病毒含量应在5.5至6.5 log₁₀/0.1ml之间。
• 若回滴结果超出此范围，应重新测试并结合数据进行评估。
• 疫苗若在回滴后仍不符合要求，需进行统计分析以决定是否重复测试。

1.3 猴子观察

• 观察期为17至22天，监测是否出现脊髓灰质炎或其他病毒感染的症状。
• 24小时内存活但11天内死亡的猴子需进行尸检以确认死亡原因。
• 严重瘫痪或濒死的猴子应人道处理并进行尸检。
• 所有存活猴子需被安乐死并进行组织分析。
• 每组中不超过20%的猴子可因并发感染被排除。

1.4 组织切片数量

• 每只猴子至少需对以下部位进行组织切片分析：
  • 腰段脊髓：12个切片
  • 颈段脊髓：10个切片
  • 延髓：2个切片
  • 脑桥和小脑：1个切片
  • 中脑：1个切片
  • 左右丘脑和大脑皮层：各1个切片
• 切片厚度为15μm，可用格拉科扬染色或尼氏染色。

1.5 病毒活性评分

• 病毒活性评分分为4级：
  • Grade 1：仅细胞浸润（如血管周围袖套状浸润），无神经元损伤。
  • Grade 2：细胞浸润伴随轻微神经元损伤。
  • Grade 3：细胞浸润伴随广泛神经元损伤。
  • Grade 4：严重神经元损伤，可能伴随或不伴随细胞浸润。
• 每个切片的评分需记录在标准表格中。
• 仅显示神经元病变但无针道的猴子视为阳性，而仅显示针道但无神经元病变的不视为阳性。

1.6 神经毒性的评估

• 疫苗需与参考病毒在相同条件下进行比较。
• 疫苗的平均病变评分（LS）需与参考病毒进行对比。
• 若疫苗的平均病变评分与参考病毒的差异超过C₁，疫苗不可接受。
• 若差异在C₁和C₂之间，疫苗可重新测试。
• 若重新测试后的差异超过C₃，疫苗应被拒绝。
• C₁、C₂、C₃的计算基于实验室数据和统计方法。

2. 接受疫苗的标准

• 每个实验室应进行至少4次“合格”测试，以确定参考疫苗的病变评分范围。
• 实验室需根据数据更新C₁、C₂、C₃的值。
• 对于类型1和2，病变评分范围为M ± s；对于类型3，为M - s/2至M + s。
• 若疫苗的病变评分超出参考范围，需重新测试或拒绝。

3. 结果报告表格

• 需使用标准表格记录每只猴子的组织切片病变评分。
• 表格需包括：
  • 测试编号、疫苗类型、单型疫苗编号、猴子种类。
  • 接种后回滴病毒滴度（log₁₀ CCID₅₀/ml）。
  • 接种日期和实验结束日期。
  • 每个切片的病变评分。
• 所有猴子的数据需被记录，且需单独记录临床症状。

附录：合规证书

• 证书需包含单型疫苗或种子编号、认证日期、签署人信息。
• 证书需证明疫苗符合WHO关于神经毒性的检测要求。