2011-06-05-世界卫生组织-Report_of_the_4th_meeting_of_the_WHO_working_group_on_polymerase_chain_reaction_protocols_for_detecting_subtype_influenza_A_viruses_10页_146kb

PCR技术在流感监测与诊断中的应用总结

发展概况

• PCR技术因快速、敏感和特异，已成为人类及动物流感感染的一线实验室检测手段，最初应用于H5N1检测，现扩展至多种流感病毒。
• WHO在GISRS框架下，通过PCR工作组提供技术指导。第四次会议（2011年）回顾了技术进展（更新协议、试剂、网站）、病毒分离的重要性、检测战略、协作网络等。
• 新PCR协议、试剂盒和检测支持（如IRRI网站、2009年大流行后修订的操作手册）正在或已发布。H5引物持续验证。

技术角色与优势

• 核心地位：PCR是流感病毒监测（快速检测新毒株）和诊断的首选方法，尤其适用于H1N1 2009、H3N2、B型病毒及潜在大流行病毒。
• 应用效果：广泛运用于疾病监测、诊断数据质量提升、实验室扩容和应急响应能力增强。尤其在2009年H1N1大流行中快速发现发挥了关键作用。
• 双重作用：作为分子诊断手段，PCRsensitive和specific, even in low bio-containment labs；同时，病毒分离仍对疫苗株推荐和抗药性监测不可或缺。两者需并存。

全球协作与实施挑战

• 地理差异：如西太平洋地区多样，国家间实验室能力、资源不同（尤其偏远地区）。
• 地域合作：通过WHOCC、H5参考实验室、Erl、NIC、OFFLU等建立网络。
• 实施难点：操作人员培训、设备维护、样本质量（运检条件）；且常面临成本、维护标准、技术优先级调整等问题。
• 样本运输：对于偏远或经济困难国家，运输、冷藏、海关审批仍是障碍。EQAP计划旨在监控并改进质量，但收效依赖于后续支持。

技术细节更新

• 协议更新：现有WHO协议（基于H1N1 2009）将在2011年更新，涵盖季节性毒株（H1、H3、B）和H5监测。正在研发H7、H9检测方案。
• 争议焦点：H7和H9除动物传人风险外，研发是否紧急？多中心协同比单中心研究更利于全国或区域覆盖，但也增加复杂性。

H5协议与质控

• H5动态：病毒变异频繁，需持续更新引物协议，支援H5流感家禽数量庞杂，需生物安全保护。
• 质控措施：EQAP（外部质量评估计划）模拟RNA样本和病毒样本检验能力，已全球化（160实验室参与），但也存在技术流程不统一、培训支持不足等问题。CDC提供分子性能评估（PEP）计划。

质量评估与质量保证(QA/QC)

• 检验质量：EQAP识别了多种问题（技术不熟练、污染、试剂不匹配、分析失误等）。问卷揭示部分实验室缺乏评估试剂/检测方案能力。
• 改进策略：细化问卷、链接更多在线资源（如CDC预计开放的注册平台）、协调培训、改善通信渠道。

未来方向与工作建议

• 持续召开：保持年度会议频率，追踪技术进展。
• 强化策略执行：对于分会（WHOCC、参考实验室等）在落实会议建议方面需更协调，特别是在PCR相关培训的支持方面。
• 拓展合作：进一步关联GISRS平台，链接其他在线资源；引入更多资源提供者参与检验支持活动（QIAs）。
• 保持活力：关注自动化、多重检测、其他病原体检测（如呼吸道病毒）。同时，标准化和跨区域质量控制不可或缺。