2012-01-30-世界卫生组织-Generic_protocol_for_the_calibration_of_seasonal_and_pandemic_influenza_antigen_working_reagents_by_WHO_essential_regulatory_laboratories,_Annex_5,_TRS_No_979_10页_190kb

Annex 5 总结：

世界卫生组织（WHO）制定的《流感抗原工作试剂校准通用规程》旨在规范并建立四个关键实验室（ERLs）在流感抗原工作（或参考）试剂制备、校准的协作流程。

该规程的核心目的是为疫苗生产企业用于灭活流感疫苗效力检测的流感抗原工作试剂赋值，确保全球范围内使用的此类试剂具有可比性和准确性。这些抗原工作试剂是灭活全病毒冻干制剂，并已完成校准。

主要内容：

1. 定义与背景：

   • 介绍了流感疫苗的重要性、WHO的全球协调机制（如GISRS）。
   • 定义了抗原工作试剂（工作参考试剂）：即已冻干并按照本规程校准的灭活全病毒制剂。

2. 参与实验室（ERLs）：

   • 列出了四个指定的WHO ERL：澳大利亚TGA、日本NIID、英国NIBSC、美国CBER。
   • 所有ERL均参与校准过程，但确认校准结果通常需要至少三个实验室的数据。指定其中一个实验室为“主导ERL”，负责制备主标准品（PLS）和冻干抗原，并进行首次校准和数据协调。

3. 校准阶段：

   • 主导实验室准备：制备PLS（稀释液标准品）和大量冻干抗原。PLS用于独立校准，冻干抗原通过SRID方法与PLS进行校准。
   • 试剂分发：PLS和冻干抗原样本同时分发至所有ERL。
   • 校准方法：采用单径扩散试验（SRID/SRID），这是一种比较病毒抗原与已知稀释度抗原扩散直径的定性/定量方法。

4. 技术细节：

   • PLS的蛋白质估计采用公认的同量异位校准法，并通过SDS-PAGE测定血凝素比例。基本原则包括质量控制、双重核查（样品间的变异应小于20%）和每个ERL的标准操作程序的一致性。

5. 结果归属与确认：

   • 各ERL独立对PLS和冻干抗原进行赋值。
   • 主导ERL汇总数据，并提出最终的通行浓度值。该值需获得所有参与ERL的同意。最终结果前需向制造商提供初步数据。

6. 替代和备用试剂校准：

   • 对于同种疫苗病毒株的替代或备用抗原试剂，采用交叉校准的方法，使用首个经校准的标准试剂作为参照，而非PLS，以确保其效力（CV < 20%）。
   • 优先鼓励使用多个实验室（包括来自其他国家的ERL或经验丰富的国家控制实验室或制造商）进行交叉校准。

7. 文件修订：

   • 定期（至少一年一次）审视和更新本规程，以采纳最佳实践和更新方法。

该规程建立了一套严谨、多中心的协作体系，确保了全球各地区用于流感疫苗效力测定的抗原工作试剂的质量和一致性。